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NEB助力新型冠狀病毒 2019-nCoV 快速診斷與研究

2020/3/20 13:19:14??????點擊:


    在 21 世紀的第一個十年,非典爆發(fā)。2003 年 7 月的數(shù)據(jù)顯示,SARS 病毒在全球 27 個國家造成了 8096 例感染病例,774人死亡。十年后,MERS 病毒引起的中東呼吸綜合征,又在 27 個國家?guī)砹?1728 例確診病例,奪走了 624 條生命。


    2020 年關將至,冠狀病毒再一次洶涌襲來。2019 年 12 月 30 日,武漢市衛(wèi)生健康委員會醫(yī)政醫(yī)管處發(fā)布《關于做好不明原因肺炎救治工作的緊急通知》,通知稱武漢部分醫(yī)療機構陸續(xù)出現(xiàn)不明原因肺炎病人,臨床表現(xiàn)均表現(xiàn)為病毒性肺炎或肺部感染。2020 年伊始,在科研人員的快速應對下,檢出一種新型冠狀病毒,并獲得該病毒的全部基因組序列。世界衛(wèi)生組織正式將造成武漢不明原因肺炎疫情的新型冠狀病毒命名為:2019-nCoV。


  十七年前抗擊 SARS 的領軍人物鐘南山院士以 83 歲高齡再次掛帥出征,于昨日接受央視采訪時指出,目前已能肯定新型的冠狀病毒能“人傳人”。幾個小時前,武漢市衛(wèi)健委也發(fā)布消息,指出“武漢共有 15 名醫(yī)務人員確診為新型冠狀病毒感染的肺炎病例”。鐘南山院士表示:當前防控最有效的辦法就是早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療、早隔離。


  從首例新型肺炎報告后的第 14 天,世界衛(wèi)生組織(WHO)宣布,已收到中國分享的從武漢不明原因病毒性肺炎病例中檢測到的新型冠狀病毒基因序列信息。到基因序列公布后的 1~2 天里,若干診斷公司根據(jù)病毒的 RNA 序列,先后宣布完成了新型冠狀病毒檢測試劑盒的開發(fā)。這些均得益于目前先進的測序手段及快速的診斷方法。當前,對冠狀病毒的診斷測試包括 RT-PCR,實時逆轉錄 PCR(rRT-PCR),逆轉錄環(huán)介導的等溫擴增(RT-LAMP)以及實時 RT-LAMP。1 月 17 日,WHO 針對發(fā)布了新型冠狀病毒診斷方案:Diagnostic detection of 2019-nCoV by real-time RT-PCR(Charité Virology, Berlin, Germany)。

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   近期,快速的診斷方案使各地新增病例得到快速確診,這增加了大家對疾病的警惕和防護,也可使流行病學監(jiān)測高效進行,以采取有效的預防措施和實施適當?shù)目共《局委煛τ谛滦凸跔畈《镜纳钊胙芯亢涂焖僭\斷方案,NEB 作為分子生物學領域的頭部供應商,能夠提供從病原體核酸提取,到二代測序建庫、RT-qPCR 和 RT-LAMP 診斷試劑的一整套完整解決方案。


01  核酸提取






貨號

名稱

規(guī)格

T2010S

Monarch Total RNA Miniprep Kit

50 preps


  • 全能:集樣本保存、細胞裂解、gDNA 去除為一體
  • 廣泛適用:適用于培養(yǎng)細胞、血液、哺乳動物組織和病毒,及難裂解樣本,如細菌、酵母和植物。
  • 高質量:A260/280 和 A260/230 比值均≥1.8,高 RIN 值和極低 gDNA 殘留(gDNA 去除柱和 DNase I)。
  • 高效:可純化總 RNA 包含小 RNA,通過改變結合條件可以選擇性地篩選<200 nt 的 RNA,包含 miRNA、5S rRNA 和 tRNA。
  • 下游應用:提取純化得到的 RNA 可用于 RT-qPCR、cDNA 合成、RNA-seq、Northern blot 分析等下游實驗。


02   RT-qPCR



貨號

名稱

規(guī)格

E3005E

Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit

2500 rxns

E3005L

Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit

500 rxns

E3005S

Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit

200 rxns

E3005X

Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit

1000 rxns

E3006E

Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit

2500 rxn

E3006L

Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit

500 rxns

E3006S

Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit

200 rxns

E3006X

Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit

1000 rxns

M0372L

Antarctic Thermolabile UDG

500 units

M0372S

Antarctic Thermolabile UDG

100 units

M0280L

Uracil-DNA Glycosylase (UDG)

5,000 units

M0280S

Uracil-DNA Glycosylase (UDG)

1,000 units


  • 使用簡便:每個產品對應一種應用,方便的預混液形式及易操作的實驗步驟
  • 性能優(yōu)異:Luna 系列產品經過嚴格的優(yōu)化及檢測以確保特異性、靈敏度、精確性及可重復性
  • 防污染:預混液中包含 dUTP,qPCR 前使用 NEB 的南極熱敏 UDG (NEB#M0372)或 UDG(NEB#M0280)進行預處理以防止產物殘留污染。
  • 避免加樣誤差:肉眼可見的藍色惰性示蹤染料,避免加樣失誤
  • 室溫建立體系:溫啟動的反轉錄酶和熱啟動 Taq 酶共同提升了反應特異性和穩(wěn)定性
*已有大型診斷公司采購 Luna 系列的 E3006 進行新型冠狀病毒檢測試劑盒的研發(fā)。


03   等溫擴增

聚合酶鏈反應(PCR)是特定 DNA 擴增技術,已被廣泛應用。然而,PCR 需要反應混合物在不同溫度之間重復循環(huán)才能實現(xiàn)擴增,因此,在分子生物學和分子診斷實驗室中還有其他序列特異性擴增方法,也像 PCR 技術一樣常被使用。這些替代方法通常不需要改變反應溫度,因此被稱為等溫擴增。等溫擴增方案多種多樣,并各具優(yōu)勢。NEB 提供品類齊全的等溫擴增系列產品,全面滿足等溫擴增檢測試劑盒的研發(fā)及生產。


貨號

名稱

規(guī)格

M0275L

Bst DNA Polymerase, Large Fragment

8,000 units

M0275M

Bst DNA Polymerase, Large Fragment

8,000 units

M0275S

Bst DNA Polymerase, Large Fragment

1,600 units

M0275V

Bst DNA Polymerase, Large Fragment

800 units

M0328S

Bst DNA Polymerase, Full Length

500 units

M0374L

Bst 3.0 DNA Polymerase

8,000 units

M0374M

Bst 3.0 DNA Polymerase

8,000 units

M0374S

Bst 3.0 DNA Polymerase

1,600 units

M0537L

Bst 2.0 DNA Polymerase

8,000 units

M0537M

Bst 2.0 DNA Polymerase

8,000 units

M0537S

Bst 2.0 DNA Polymerase

1,600 units

M0538L

Bst 2.0 WarmStart DNA Polymerase

8,000 units

M0538M

Bst 2.0 WarmStart? DNA Polymerase

8,000 units

M0538S

Bst 2.0 WarmStart DNA Polymerase

1,600 units

M0330L

Bsu DNA Polymerase, Large Fragment

1,000 units

M0330S

Bsu DNA Polymerase, Large Fragment

200 units

E1700L

WarmStart LAMP Kit (DNA & RNA)

500 rxns

E1700S

WarmStart LAMP Kit (DNA & RNA)

100 rxns

M1800L

WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix (DNA & RNA)

500 rxns

M1800S

WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix (DNA & RNA)

100 rxns

M0249L

RecA

1,000 ug

M0249S

RecA

200 ug

M2401S

ET SSB

50 ug

M0300L

T4 Gene 32 Protein

500 ug

M0300S

T4 Gene 32 Protein

100 ug


04  反轉錄


針對 RNA 病毒檢測的反轉錄步驟,NEB 提供高靈敏度、適應不同溫度、以及更低起始量的一系列反轉錄酶及試劑盒。


貨號

名稱

規(guī)格

E5310S

OneTaq RT-PCR Kit

30 rxns

E5315S

OneTaq One-Step RT-PCR Kit

30 rxns

E6300L

ProtoScript First Strand cDNA Synthesis Kit

150 rxns

E6300S

ProtoScript First Strand cDNA Synthesis Kit

30 rxns

E6560L

ProtoScript II First Strand cDNA Synthesis Kit

150 rxns

E6560S

ProtoScript II First Strand cDNA Synthesis Kit

30 rxns

M0253L

M-MuLV 

Reverse Transcriptase

50,000 units

M0253S

M-MuLV 

Reverse Transcriptase

10,000 units

M0277L

AMV 

Reverse Transcriptase

1,000 units

M0277S

AMV 

Reverse Transcriptase

200 units

M0368L

ProtoScript II 

Reverse Transcriptase

10,000 units

M0368S

ProtoScript II Reverse Transcriptase

4,000 units

M0368X

ProtoScript II 

Reverse Transcriptase

400,00 units

M0380L

WarmStart RTx Reverse Transcriptase

250 rxns

M0380S

WarmStart RTx Reverse Transcriptase

50 rxns

S1230S

Random Primer 6

1.0 A260 units

S1254S

Random Primer 9

1.0 A260 units

S1316S

Oligo d(T)18 mRNA Primer

5.0 A260 units

S1327S

Oligo d(T)23 VN

1.0 A260 units

S1330S

Random Primer Mix

100 μl (60 μM)


05  二代測序


2003 年 4 月 14 日,SARS 病毒樣本在華大基因實驗室完成 RNA 測序,此時距離首例感染病例的發(fā)現(xiàn)已過去了 100 多天。而此次,距離首例新型肺炎報告僅 14 天,WHO 已收到新型冠狀病毒基因序列信息。這得益于 16 年間二代測序技術的蓬勃發(fā)展和中國醫(yī)療工作者的不斷開拓。
NEB 公司擁有十年開發(fā)二代測序建庫產品的經驗,NEBNext 系列產品不斷在簡化工作流程、最小起始量、更高的文庫產量和質量等方面進行優(yōu)化,助力更多科研工作者針對病毒樣本進行深入研究。
NEBNext 單細胞/超低起始量 RNA 文庫制備試劑盒(NEB #E6420)可直接從單個細胞或 2 pg-200 ng 的 RNA 構建成全長轉錄本的高質量文庫。優(yōu)化的cDNA 合成 & 擴增模塊(NEB #E6421)包含模板轉換,可單管完成從細胞裂解到 cDNA 的全部實驗流程。同時該試劑盒中的 NEBNext Ultra? II FS DNA 文庫制備試劑盒(NEB #E7805、E6177)可用于逆轉錄后的病毒 cDNA 文庫構建,并提供 DNA 片段化試劑,將 DNA 片段化、末端修復和加 dA 尾優(yōu)化到一步,可在單管中完成,省去了繁瑣的純化步驟,進一步防止病毒樣品損失。


貨號

名稱

規(guī)格

E6420S/L

NEBNext 單細胞/超低起始量 RNA 文庫制備試劑盒

24/96 rxns

E6421S/L

NEBNext 單細胞/超低起始量 cDNA 合成 & 擴增模塊

24/96 rxns

E7805S/L

NEBNext Ultra II FS DNA 文庫制備試劑盒 - 含片段化酶

24/96 rxns

E6177S/L

NEBNext Ultra II FS DNA 文庫制備試劑盒 - 含片段化酶/含純化磁珠

24/96 rxns


溫馨提示:病毒流感高發(fā)期,請務必注意個人衛(wèi)生,勤洗手,保持居住環(huán)境的清潔,多開窗通風,盡量少去人多密集的公共場所,出門記得戴口罩。





北京百靈克生物科技有限責任公司
公司地址:北京海淀區(qū)永定路88號長銀大廈9C05
咨詢熱線:010-58895880/58896088
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